Мікрабіялагічныя метады даследавання вады, глебы, паветра

Мікраарганізмы - драбнюткія, галоўным чынам аднаклетачныя істоты, шырока распаўсюджаныя ў прыродзе. Яны выяўляюцца ва ўсіх асяроддзях (паветры, глебе, вадзе), у арганізме чалавека і жывёл, у раслінах.

Якаснае разнастайнасць і колькасць мікраарганізмаў залежаць у першую чаргу ад пажыўных злучэнняў. Аднак немалаважнае значэнне маюць таксама вільготнасць, тэмпературны рэжым, аэрацыя, дзеянне сонечных прамянёў і іншыя фактары.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. Метады санітарна-мікрабіялагічнага даследавання прыродных асяроддзяў дазваляюць выявіць наяўнасць патагенных мікраарганізмаў, вызначыць іх колькасць і, у адпаведнасці з атрыманымі вынікамі, выпрацаваць меры па ліквідацыі або папярэджанні інфекцыйных захворванняў. Акрамя таго, колькасны ўлік неабходны для мадэлявання экасістэм і распрацоўцы прынцыпаў кіравання натуральнымі працэсамі. . Разгледзім далей, якімі бываюць метады мікрабіялагічнага даследавання.

глеба

Яна разглядаецца навукоўцамі як адзін з магчымых шляхоў перадачы інфекцыйных паталогій. З вылучэннямі хворых людзей або жывёл у глебу пранікаюць патагенныя мікраарганізмы. Некаторыя з іх, у прыватнасці, Спорава, здольныя захоўвацца ў грунце працяглы час (часам некалькі дзясяткаў гадоў). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). У глебу трапляюць ўзбуджальнікі такіх небяспечных інфекцый, як слупняк, сібірская язва, батулізм і пр. Метады санітарна-мікрабіялагічнага даследавання глебы дазваляюць вызначыць "мікробнае лік" (кол-у мікраарганізмаў у граме грунту), а таксама калі-індэкс (колькасць кішачных палачак) .

Аналіз грунту: агульныя звесткі

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. Да метадаў мікрабіялагічнага даследавання глебы варта ў першую чаргу аднесці прамое микроскопирование і пасеў на шчыльную пажыўнае асяроддзе. Папуляцыі мікраарганізмаў і іх групы, якія насяляюць грунт, адрозніваюцца па таксанамічных становішчу і экалагічным функцый. У навуцы яны аб'яднаны пад агульным тэрмінам "глебавая біёты". Грунт - асяроддзе пасялення вялізнага колькасці мікраарганізмаў. У граме глебы прысутнічае ад 1 да 10 млрд іх клетак. У гэтым асяроддзі актыўна працякае раскладанне арганічных рэчываў пры ўдзеле разнастайных сапрофитных мікраарганізмаў.

Мікраскапічны метад мікрабіялагічнага даследавання: этапы

Аналіз асяроддзя пачынаецца з адбору узораў. Для гэтага выкарыстоўваюць папярэдне вычышчаны і працёрты спіртам нож (можна выкарыстоўваць рыдлёўку). Пасля гэтага ажыццяўляецца падрыхтоўка ўзору. Наступны этап - падлік клетак на афарбаваных мазках. Разгледзім кожную стадыю паасобку.

адбор узораў

Пры аналізе ворнай глебы, як правіла, пробы бяруць з глыбіні ўсяго пласта. Спачатку выдаляецца 2-3 см зверху грунту, бо ў ім можа прысутнічаць старонняя мікрафлора. Пасля гэтага з вывучаемага ўчастка грунту бяруць маналіты. Даўжыня кожнага з іх павінна адпавядаць таўшчыні пласта, з якога трэба ўзяць ўзор.

На ўчастку ў 100-200 кв. м адбіраецца 7-10 пробаў. Вага кожнай - каля 0.5 кг. Пробы неабходна старанна перамяшаць ў мяшку. Пасля гэтага бяруць сярэдні ўзор, вагой прыблізна 1 кг. Яго варта змясціць у пергаментны (стэрыльны) пакет, укладзены ў тканкавы мяшок. Да непасрэднага аналізу ўзор захоўваецца ў халадзільніку.

Падрыхтоўка да даследавання

Перамешаная глеба высыпаецца на сухое шкло. Папярэдне яго неабходна працерці спіртам і абпаліць над гарэлкай. Пры дапамозе шпателя глеба старанна змешваецца і раскладваецца роўным пластом. У абавязковым парадку неабходна выдаліць карэньчыкі, іншыя староннія элементы. Для гэтага выкарыстоўваецца пінцэт. Перад працай пінцэт і шпатель прокаливают над гарэлкай і астуджаюць.

З розных участкаў глебы, размеркаванай па шкле, адбіраюцца невялікія порцыі. Іх узважваюць ў фарфоравай кубку на тэхнічных вагах. является специальная обработка образца. Абавязковым этапам мікраскапічнага метаду мікрабіялагічнага даследавання з'яўляецца адмысловая апрацоўка ўзору. Загадзя неабходна падрыхтаваць 2 стэрыльныя колбы. Іх ёмістасць не павінна перавышаць 250 мл. У адну з колбаў наліваюць 100 мл вадаправоднай вады. З яе бяруць 0.4-0.8 мл вадкасці і ўвільгатняюць навеску глебы да пастообразного станы. Сумесь неабходна расцерці пальцам або гумовым песцікам на працягу 5 мін.

Вадой з першай колбы глебавую масу пераносяць у пустую колбу. Далей яе зноў расціраюць. Пасля гэтага маса пераносіцца ў колбу каля полымя гарэлкі. Ёмістасць з глебавай завіссю падтрасаюць на пампавалцы на працягу 5 хвілін. Пасля гэтага яе пакідаюць адстойвацца каля 30 с. Гэта неабходна для таго, каб буйныя часціцы аселі. Праз паўхвіліны масу выкарыстоўваюць для прыгатавання прэпарата.

Падлік клетак на фіксаваных мазках

, разработанному Виноградским. Прамое мікраскапічнае вывучэнне грунту ажыццяўляецца па метадзе мікрабіялагічнага даследавання, распрацаваным Вінаградская. У пэўным аб'ёме прыгатаванай завісі падлічваецца лік клетак мікраарганізмаў. Вывучэнне фіксаваных мазкоў дазваляе захоўваць прэпараты на працягу доўгага тэрміну і выконваць падлікі ў любы зручны час.

Падрыхтоўка прэпарата ажыццяўляецца наступным чынам. Пэўны аб'ём завісі (як правіла, 0.02-0.05 мл) наносіцца з дапамогай микропипетки на прадметнае шкло. Да яго дадаюць кроплю раствора агар-агара (сумесі поліцукрыдаў агаропектина і агарозы, вынятых з бурых і чырвоных багавіння Чорнага мора), хутка змешваюць і размяркоўваюць на плошчы 4-6 кв. см. Мазок высушваецца на паветры і фіксуецца 20-30 мін. спіртам (96%). Далей прэпарат ўвільгатняюць дыстыляванай вадой, змяшчаюць у р-р карболовой эритрозина на 20-30 мін.

Пасля афарбоўвання яго промывают і высушваюць на паветры. Падлік клетак ажыццяўляецца з иммерсионным аб'ектывам.

Пасеў на шчыльныя асяроддзя

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Мікраскапічныя метады мікрабіялагічнага даследавання дазваляюць выявіць вялікую колькасць мікраарганізмаў. Але, нягледзячы на гэта, метад пасеву лічыцца найбольш распаўсюджаным ў практыцы. Сутнасць яго складаецца ў высеву аб'ёму прэпарата (глебавай завісі) у кубку Петры на шчыльную асяроддзе.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Гэты метад мікрабіялагічнага даследавання дазваляе ўлічваць не толькі колькасць, але і групавы, а ў шэрагу выпадкаў і відавы склад мікраскапічнай флоры. Падлік ліку калоній вырабляецца, як правіла, з дна кубкі Петры ў які праходзіць святле. На падлічаць ўчастку ставіцца кропка маркерам альбо чарніламі.

аналіз вады

Мікрафлора воднага аб'екта, як правіла, адлюстроўвае мікробны склад глебы каля яго. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. У гэтай сувязі метады санітарна-мікрабіялагічнага даследавання вады і глебы маюць асаблівае практычнае значэнне пры вывучэнні стану канкрэтнай экасістэмы. У прэсных вадаёмах ўтрымліваюцца, як правіла, кокі, палачкападобныя бактэрыі.

Анаэробы ў вадзе выяўляюцца ў малой колькасці. Як правіла, яны множацца на дне вадаёмаў, у глеі, прымаючы ўдзел у працэсах ачышчэння. Мікрафлора акіянаў і мораў прадстаўлена пераважна солелюбивыми (галафільныя) бактэрыямі.

У вадзе артэзіянскіх свідравін мікраарганізмаў практычна няма. Гэта абумоўліваецца фільтруе здольнасцю глебавага пласта.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. Агульнапрынятымі метадамі мікрабіялагічнага даследавання вады лічацца вызначэнне мікробнага колькасці і калі-тытра альбо калі-індэкса. Першы паказчык характарызуе колькасць бактэрый у 1 мл вадкасці. Колі-індэкс ўяўляе сабой колькасць кішачных палачак, прысутных у літры вады, а калі-тытр - мінімальная колькасць або максімальную развядзенне вадкасці, у якім іх яшчэ можна выявіць.

Вызначэнне мікробнага колькасці

Гэты метад санітарна мікрабіялагічнага даследавання вады складаецца ў наступным. У 1 мл вады вызначаюць колькасць факультатыўных анаэробов і мезафільныя (прамежкавых) аэробов, здольных на мясопептонном агар (асноўны пажыўнай асяроддзі) пры 37 град. на працягу сутак фармаваць калоніі, бачныя пры павелічэнні ў 2-5 р. або няўзброеным вокам.

является посев. Ключавой стадыяй разгляданага метаду мікрабіялагічнага даследавання вады з'яўляецца пасеў. З кожнай пробы робіцца пасеў не менш 2-х розных аб'ёмаў. Пры аналізе вадаправоднай вады ў кожную кубак ўносяць па 1-0.1 мл чыстай вадкасці і па 0.01-0.001 мл забруджанай. Для пасеву 0.1 мл ці меншага аб'ёму вадкасць разводзіцца дыстыляванай (стэрыльнай) вадой. Паслядоўна рыхтуюць дзесяціразова гадоўлі. Па 1 мл ад кожнага з іх ўносяць у два кубкі Петры.

Разьвядзеньне заліваюцца пажыўным агаром. Яго неабходна папярэдне падпаліць і астудзіць да 45 град. Пасля актыўнага мяшання сераду пакідаюць на гарызантальнай паверхні для застывання. Пры 37 град. пасевы вырошчваюць на працягу сутак. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. Разгляданы метад мікрабіялагічнага даследавання вады дазваляе ўлічваць вынікі на тых кубках, дзе колькасць калоній знаходзіцца ў межах ад 30 да 300.

паветра

Ён лічыцца транзітнай асяроддзем для мікраарганізмаў. являются седиментация (оседание) и аспирация. Асноўнымі метадамі мікрабіялагічнага даследавання паветра з'яўляюцца седыментацыю (ссяданне) і аспірацыя.

Мікрафлора паветранай асяроддзя ўмоўна падзяляецца на зменную і пастаянную. Да першай адносяцца дрожджы, пигментообразующие кокі, спороносные бацылы, палачкі і іншыя мікраарганізмы, устойлівыя да высыхання, ўздзеяння святла. Прадстаўнікі зменнай мікрафлоры, пранікаючы ў паветра з звыклай для іх асяроддзя пражывання, нядоўга захоўваюць сваю жыццяздольнасць.

У паветры буйных мегаполісаў мікраарганізмаў нашмат больш, чым у паветраным асяроддзі сельскай мясцовасці. Над марамі, лясамі бактэрый вельмі мала. Ачышчэнню паветра спрыяюць ападкі: снег і дождж. У закрытых памяшканнях мікробаў нашмат больш, чым на адкрытых прасторах. Іх колькасць павялічваецца ў зімовы перыяд пры адсутнасці рэгулярнага ветрання.

седыментацыю

считается простейшим. Гэты метад мікрабіялагічнага даследавання ў мікрабіялогіі лічыцца найпростым. Ён грунтуецца на ссядання кропель і часціц на паверхні агара ў адкрытай кубку Петры пад дзеяннем сілы цяжару. Метад седыментацыю не дазваляе дакладна вызначыць колькасць бактэрый у паветры. Справа ў тым, што на адкрытай кубку ўлавіць дробныя фракцыі пылавых часціц і бактэрыяльных кропель даволі складана. На паверхні затрымліваюцца пераважна буйныя часціцы.

Гэты метад не выкарыстоўваецца пры аналізе атмасфернага паветра. Гэтым асяроддзі ўласцівыя вялікія ваганні хуткасці руху паветраных патокаў. Седыментацыю, аднак, можа выкарыстоўвацца пры адсутнасці больш дасканалых прыбораў або крыніцы электраэнергіі.

Вызначэнне мікробнага колькасці ажыццяўляецца па метадзе Омелянского. У адпаведнасці з ім, за 5 хвілін на паверхні агара плошчай 100 кв. см асядае такое лік бактэрыяў, якое прысутнічае ў 10 л паветра.

Загад 535 "Аб уніфікацыі мікрабіялагічных метадаў даследавання"

Бактэрыялагічны аналіз займае важнейшае месца ў комплексе клініка-лабараторных мерапрыемстваў, накіраваных на дыягностыку, прафілактыку і лячэнне разнастайных інфекцыйных захворванняў. Аднак даследаваннем навакольнага асяроддзя яны не абмяжоўваюцца.

Асаблівае значэнне мае бактэрыялагічны аналіз біялагічнага матэрыялу ў лячэбных установах. Да даследаваннях, што праводзяцца ў медустановах, прад'яўляюцца павышаныя патрабаванні. Мэтай Загаду "Аб уніфікацыі мікрабіялагічных метадаў даследавання" з'яўляецца ўдасканаленне бактэрыялагічнага аналізу, павышэнне якасці і эфектыўнасці мікрабіялагічнай дыягностыкі.

Мікраскапічнае даследаванне мазкоў ў жанчын

Яно з'яўляецца ключавым метадам аналізу пры дыягностыцы інфекцый, якія перадаюцца палавым шляхам, і апартуністычных захворванняў (выкліканых ўмоўна-патагеннымі бактэрыямі).

Мікраскапічны аналіз дазваляе ацаніць якасны і колькасны склад мікрафлоры, праверыць правільнасць ўзяцця пробы. Да прыкладу, наяўнасць вагінальнага эпітэлія ў мазку, ўзятым з цервікального канала, паказвае на парушэньне правілаў адбору біялагічнай пробы.

Варта сказаць, што мікрабіялагічнае абследаванне ў дадзеным выпадку наогул суправаджаецца пэўнымі праблемамі. Яны звязаны з тым, што ў ніжніх аддзелах палавога гасцінца ў норме прысутнічае разнастайная мікрафлора, зменлівая ў розныя ўзроставыя перыяды. Для павышэння эфектыўнасці даследаванні і былі распрацаваны уніфікаваныя правілы.

Дыягностыка вірусных інфекцый

Яна ажыццяўляецца метадамі выяўлення РНК і ДНК-узбуджальнікаў. Яны грунтуюцца пераважна на вызначэнні нуклеотидных паслядоўнасцяў ў паталагічным матэрыяле. Для гэтага выкарыстоўваюцца малекулярныя зонды. Яны ўяўляюць сабой штучна атрыманыя нуклеінавыя кіслоты, камплементарныя (дапаўняюць) вірусным кіслот, мечаныя радыёактыўнай пазнакай або біятын.

Асаблівасць метаду складаецца ў шматразовым капіяванні канкрэтнага фрагмента ДНК, які ўключае ў сябе некалькі сотняў (ці дзясяткаў) нуклеотидных пар. Механізм рэплікацыі (капіраванне) заключаецца ў тым, што достраивание можа пачацца выключна ў пэўных блоках. Для іх стварэння выкарыстоўваюцца праймер (затраўкі). Яны ўяўляюць сабой сінтэзаваныя олигонуклеотиды.

ПЦР-дыягностыка (палімеразнай ланцуговай рэакцыі) простая ў выкананні. Гэты метад дазваляе хутка атрымаць вынік пры выкарыстанні невялікага аб'ёму паталагічнага матэрыялу. З дапамогай ПЦР-дыягностыкі выяўляюцца вострыя, хранічныя і латэнтныя (схаваныя) інфекцыі.

Пры адчувальнасці гэты метад лічыцца больш пераважнай. Аднак у цяперашні час тэст-сістэмы недастаткова надзейныя, таму ПЦР-дыягностыка не можа цалкам замяніць традыцыйныя методыкі.