Сералагічныя рэакцыі: віды, выкарыстанне

Лабараторная дыягностыка практычна ўсіх інфекцыйных захворванняў заснавана на выяўленні ў крыві хворага антыцелаў, якія выпрацоўваюцца на антыгены ўзбуджальніка, метадамі сералагічныя рэакцый. Яны ўвайшлі ў медычную практыку з канца дзевятнаццатага - пачатку дваццатага стагоддзя.

Развіццё навукі дапамагло вызначыць антыгенную структуру мікробаў і хімічныя формулы іх таксінаў. Гэта дазволіла стварыць не толькі лячэбныя, але і дыягнастычныя сыроваткі. Іх атрымліваюць шляхам увядзення аслабленых узбуджальнікаў лабараторным жывёлам. Пасля некалькіх дзён вытрымкі з крыві трусоў ці мышэй рыхтуюць прэпараты, якія выкарыстоўваюцца для ідэнтыфікацыі мікробаў або іх таксінаў, выкарыстоўваючы сералагічныя рэакцыі.

Вонкавая праява такой рэакцыі залежыць ад умоў яе пастаноўкі і ад стану антыгенаў ў крыві хворага. Калі часцінкі мікробаў нерастваральныя, то яны абложваюцца, лизируются, злучаюцца ці иммобилизуются ў сыроватцы. Калі антыгены растваральныя, то выяўляецца феномен нейтралізацыі або преципитации.

Рэакцыя аглютынацыі (РА)

Сералагічныя рэакцыі аглютынацыя з'яўляецца высокоспецифичной. Яна простая ў выкананні і досыць наглядна, каб хутка вызначыць наяўнасць антыгенаў ў сыроватцы крыві хворага. Яе выкарыстоўваюць для пастаноўкі рэакцыі Відаль (дыягностыка брушнога тыфа і паратыфу) і Вейгл (сыпны тыф).

Яна заснавана на спецыфічным узаемадзеянні паміж антыцеламі чалавека (або агглютининами) і мікробным клеткамі (агглютеногенами). Пасля іх узаемадзеяння ўтвараюцца часціцы, якія выпадаюць у асадак. Гэта і ёсць станоўчы прыкмета. Для пастаноўкі рэакцыі могуць выкарыстоўвацца жывыя ці забітыя мікробныя агенты, грыбы, найпростыя, клеткі крыві і саматычныя клеткі.

Хімічна рэакцыя разбіта на два этапы:

1. Спецыфічнае злучэнне антыцелаў (АТ) з антыгенам (АГ).
2. Неспецыфічныя - асаджэнне кангламератаў АГ-АТ, то ёсць адукацыю агглютината.

Рэакцыя непрамы аглютынацыі (РПГА)

Дадзеная рэакцыя валодае большай адчувальнасцю, чым папярэдняя. Яе выкарыстоўваюць для дыягнаставання захворванняў, выкліканых бактэрыямі, ўнутрыклеткавых паразітамі, найпростымі. Яна настолькі спецыфічная, што дазваляе выявіць нават вельмі нізкую канцэнтрацыю антыцелаў.

Для яе пастаноўкі выкарыстоўваюць вычышчаныя барановыя эрытрацыты і чырвоныя крывяныя цельцы чалавека, папярэдне апрацаваныя антыцеламі або антыгенамі (гэта залежыць ад таго, што менавіта лабарант хоча знайсці). У некаторых выпадках чалавечыя эрытрацыты апрацоўваюць імунаглабулінамі. Сералагічныя рэакцыі эрытрацытаў адбыліся, калі адбылося іх асаджэнне на дно прабіркі. Аб станоўчай рэакцыі можна казаць, калі клеткі размяшчаюцца ў выглядзе перавернутага парасоніка, займаючы ўсё дно. Адмоўная рэакцыя залічваецца, калі эрытрацыты аселі слупком або ў выглядзе гузік ў цэнтры дна.

Рэакцыя преципитации (РП)

Сералагічныя рэакцыі гэтага тыпу служаць для выяўлення вельмі малых часціц антыгенаў. Гэта могуць быць, напрыклад, вавёркі (або іх часткі), злучэння бялкоў з ліпідамі або вугляводамі, часткі бактэрый, іх таксіны.

Сыроваткі для правядзення рэакцыі атрымліваюць шляхам штучнага заражэння жывёл, звычайна трусоў. Такім спосабам можна атрымае абсалютна любую преципитирующую сыроватку. Пастаноўка сералагічныя рэакцый преципитации падобная па механізме дзеяння на рэакцыі аглютынацыі. Антыцелы, якія змяшчаюцца ў сыроватцы, злучаюцца з антыгенамі ў коллоідных растворы, утвараючы буйныя бялковыя малекулы, якія абложваюцца на дно прабіркі або на субстрат (гель). Гэты спосаб лічыцца высокоспецифичным і можа выявіць нават нікчэмна малыя колькасці рэчыва.

Выкарыстоўваецца для дыягностыкі чумы, тулярэміі, сібірскай язвы, менінгіту і іншых захворванняў. Акрамя таго, задзейнічаны ў судова-медыцынскай экспертызе.

Рэакцыя преципитации ў гелі

Сералагічныя рэакцыі можна праводзіць не толькі ў вадкай асяроддзі, але і ў агаровом гелі. Гэта называецца метад дыфузнай преципитации. З яго дапамогай вывучаюць склад складаных антыгенных сумесяў. Гэты спосаб заснаваны на хемотаксисе антыгенаў да антыцелы і наадварот. У гелі яны рухаюцца насустрач адзін аднаму з рознай хуткасцю і, сустракаючыся, ўтвараюць лініі преципитации. Кожная лінія - адзін камплект АГ-АТ.

Рэакцыя нейтралізацыі экзотоксіны антитоксином (РН)

Антытаксічнае сыроваткі здольныя нейтралізаваць дзеянне экзотоксіны, які выпрацоўваюць мікраарганізмы. На гэтым і заснаваныя дадзеныя сералагічныя рэакцыі. Мікрабіялогія выкарыстоўвае гэты спосаб для тытраванне сываратак, таксінаў і анатаксінаў, а таксама вызначэння іх лячэбнай актыўнасці. Сіла нейтралізацыі таксіну вызначаецца умоўнымі адзінкамі - АЕ.

Акрамя таго, дзякуючы гэтай рэакцыі можна вызначыць відавую або тыпавую прыналежнасць экзотоксіны. Гэтая заява дзейнічае пры дыягностыцы слупняка, дыфтэрыі, батулізму. Даследаванне можна праводзіць як «на шкле», так і ў гелі.

Рэакцыя лізіс (РЛ)

Імунная сыроватка, якая трапляе ў арганізм хворага, валодае, акрамя сваёй асноўнай функцыі пасіўнага імунітэту, яшчэ і лизирующими ўласцівасцямі. Яна здольная раствараць мікробныя агенты, клеткавыя чужародныя элементы і вірусы, якія паступаюць у арганізм хворага. У залежнасці ад спецыфічнасці якія ўваходзяць у склад сыроваткі антыцелаў вылучаюць бактериолизины, цитолизины, спирохетолизины, гемолизины і іншыя.

Гэтыя спецыфічныя антыцелы называюцца "комплемент". Ён утрымліваецца практычна ва ўсіх вадкасцях цела чалавека, мае складаную бялковую структуру і вельмі адчувальны да павышэння тэмпературы, ўстрэсвання, дзеяння кіслот і прамых сонечных прамянёў. Але ў высушаным стане здольны захоўваць свае лизирующие ўласцівасці да паўгода.

Існуюць такія віды сералагічныя рэакцый гэтага тыпу:

- бактериолиз;

- гемолізу.

Бактериолиз праводзяць, выкарыстоўваючы сыроватку крыві пацыента і спецыфічную імунную сыроватку з жывымі мікробамі. Калі ў крыві прысутнічае дастатковую колькасць камлементу, то даследчык ўбачыць лізіс бактэрый, і рэакцыя будзе лічыцца станоўчай.

Другая сералагічныя рэакцыі крыві заключаецца ў тым, што завісь эрытрацытаў хворага апрацоўваюць сыроваткай, якая змяшчае гемолизины, якія актывізуюцца толькі ў прысутнасці пэўнага кампліменту. Калі такі маецца, то лабарант назірае растварэнне чырвоных клетак крыві. Дадзеная рэакцыя шырока выкарыстоўваецца ў сучаснай медыцыне для вызначэння тытра камлементу (гэта значыць яго найменшай колькасці, правакацыйнага лізіс эрытрацытаў) у сыроватцы крыві і для пастаноўкі аналізу на звязванне камлементу. Менавіта гэтым спосабам праводзіцца сералагічныя рэакцыі на пранцы - рэакцыя Вассермана.

Рэакцыя звязвання камлементу (РСК)

Гэтая рэакцыя выкарыстоўваецца для таго, каб выявіць у сыроватцы крыві хворага антыцелы да інфекцыйнага агенту, а таксама з мэтай ідэнтыфікаваць ўзбуджальніка па яго антыгеннай структуры.

Да гэтага моманту мы апісвалі простыя сералагічныя рэакцыі. РСК лічыцца складанай рэакцыяй, так як у ёй ўзаемадзейнічаюць не два, а тры элемента: антыцела, антыген і комплемент. Сутнасць яе заключаецца ў тым, што ўзаемадзеянне паміж антыцелы і антыгенам адбываецца толькі ў прысутнасці бялкоў кампліменту, якія адсарбуюцца на паверхні ўтварылася комплексу АГ-АТ.

Самі антыгены, пасля далучэння камлементу, падвяргаюцца істотным зменам, якія і паказваюць якасць праведзенай рэакцыі. Гэта можа быць лізіс, гемолізу, імабілізацыі, бактэрыцыднае або бактеріостатіческое дзеянне.

Сама рэакцыя адбываецца ў дзве фазы:

1. Адукацыя комплексу антыген-антыцелы, якое візуальна не прыкметна даследніку.
2. Змена антыгена пад дзеяннем камлементу. Гэтая фазу часцей за ўсё можна адсачыць няўзброеным вокам. Калі ж візуальна рэакцыі не відаць, то выкарыстоўваюць дадатковую індыкатарную сістэму, якая дазваляе выявіць змены.

індыкатарная сістэма

Дадзеная рэакцыя заснавана на злучэнні камлементу. У доследную прабірку праз гадзіну пасля пастаноўкі РСК дадаюць вычышчаныя эрытрацыты барана і гемалітычная сыроватку, якая не ўтрымлівае камлементу. Калі ў прабірцы застаўся незвязаны комплемент, то ён далучыцца да комплексу АГ-АТ, адукаванаму паміж Баранаў клеткамі крыві і гемолизином, і выкліча іх растварэнне. Гэта будзе азначаць, што РСК адмоўная. Калі эрытрацыты засталіся цэлымі, то, адпаведна, рэакцыя станоўчая.

Рэакцыя гемагглютинации (РГА)

Існуюць дзве прынцыпова розныя рэакцыі гемагглютинации. Адна з іх - сералагічныя, яна выкарыстоўваецца для вызначэння груп крыві. У гэтым выпадку эрытрацыты ўзаемадзейнічаюць з антыцеламі.

А другая рэакцыя не адносіцца да сералагічныя, так як чырвоныя крывяныя цельцы рэагуюць з гемагглюцінін, Прадуцыраваная вірусамі. Бо кожны ўзбуджальнік дзейнічае толькі на канкрэтныя эрытрацыты (курыныя, барановыя, як малпа), то можна лічыць гэтую рэакцыю узкоспецифичной.

Зразумець, станоўчая рэакцыя або адмоўная, можна па размяшчэнні клетак крыві на дне прабіркі. Калі іх малюнак нагадвае перавернуты парасон, значыць, шуканы вірус прысутнічае ў крыві хворага. А калі ўсё эрытрацыты склаліся накшталт манетнага слупка, то шуканых узбуджальнікаў няма.

Рэакцыя тармажэння гемагглютинации (РТГА)

Гэта высокоспецифичная рэакцыя, якая дазваляе ўсталяваць выгляд, тып вірусаў або наяўнасць спецыфічных антыцелаў у сыроватцы крыві пацыента.

Сутнасць яе заключаецца ў тым, што антыцелы, дададзеныя ў прабірку з доследным матэрыялам, перашкаджаю асаджэнні антыгенаў на эрытрацытах, тым самым спыняючы гемагглютинацию. Гэта і з'яўляецца якасным прыкметай наяўнасці ў крыві спецыфічных антыгенаў да пэўнага шуканага вірусу.

Рэакцыя иммунофлюоресценции (РЫФ)

У аснове рэакцыі ляжыць здольнасць выяўляць комплексы АГ-АТ пры люмінесцэнтнай мікраскапіі пасля іх апрацоўкі флюорохромными фарбавальнікамі. Гэта метад просты ў звароце, не патрабуе выдзялення чыстай культуры і займае мала часу. Ён незаменны для экспрэс-дыягностыкі інфекцыйных захворванняў.

У практыцы гэтыя сералагічныя рэакцыі дзеляцца на два выгляду: прамыя і непрамыя.

Прамая РЫФ вырабляецца з антыгенам, які загадзя апрацаваны флюарэсцуе сыроваткай. А непрамая заключаецца ў тым, што спачатку прэпарат апрацоўваюць звычайным діагностікумом, якія змяшчаюць антыгены да шуканым антыцелы, а затым паўторна наносіцца флюарэсцэнтная сыроватка, якая спецыфічная да вавёрак комплексу АГ-АТ, і мікробныя клеткі становяцца прыкметныя пры мікраскапіі.